在抗体浓度、孵育时间等条件完全相同的情况下,N2DAB 显色法灵敏度最高、反差强,AEC 显色效果也较好,DAB 效果最差。结论　N2DAB 显色敏感性较DAB 高8～12 倍,特别适合于难以显示的抗原。其操作简单,仅需在显色时加入少量硫酸镍铵即可,所需抗体浓度大大降低,并可结合DAB 或AEC进行双重标记,是一种值得推荐的免疫细胞化学显色方法。

不同的显色方法对同一实验结果的影响很大,尤其是对一些弱表达的抗原或ER2β一 类的核抗原,用常规DAB 等显色法很难显示出来,因此可能产生完全相反的结果。DAB 作为实验室最常用的免疫细胞化学显色试剂,在本研究所用的三种显色法中敏感性最差,几乎不能检测到ER2β的表达。AEC 显色效果较DAB 好,但该法显示的切片只能用水溶性封片剂或甘油等封片,这样对观察带来一定的不利影响,而且也不能长期保存。虽然采用抗原修复对DAB 的显色有一定增强,但是抗原修复常常导致组织切片脱落、甚至破碎。延长切片在抗体内的孵育时间或提高抗体浓度也可改善显色结果,但同时可能导致显色背景过 高。

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